臨床執業醫師考試生物化學知識點精講

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3.膜受體激素信號傳導機制

3.1.蛋白激酶a通路

蛋白激酶a(pka)是依賴camp的蛋白激酶的簡稱。以改變靶細胞內camp濃度和蛋白激酶a活性為主要特征，是激素調節物質代謝的主要通路之一。

例題

在膜受體激素信號傳導機制中依賴于camp的蛋白激酶為：

a 酪氨酸蛋白激酶 b 蛋白激酶c

c 蛋白激酶a d 蛋白激酶b

答案：c

3.2.蛋白激酶c通路

肌醇三磷酸(ip3)和甘油二酯(dag)是細胞內的第二信使。dag為脂溶性分子，生成后仍留在質膜上。dag和ca2+在細胞內的靶分子之一是蛋白激酶c(pkc)。pkc作用的底物蛋白質包括質膜受體、膜蛋白、多種酶和轉錄因子等。因此，通過pkc對下游靶蛋白的磷酸化修飾，參與多種生理功能的調節。

例題

依賴ca2+的蛋白激酶是：

a.pka b.pkc

c.pkg d.rtk

e.g蛋白

答案：b

3.3.酪氨酸蛋白激酶通路

酪氨酸蛋白質激酶(tpk)催化蛋白質分子中的酪氨酸殘基磷酸化，部分位于細胞膜的生長因子類受體屬于tpk。這些受體被稱為受體型tpk。受體型tpk與配體結合后，將形成二聚體，同時酶活性增高，使受體胞內部分的酪氨酸磷酸化增強，磷酸化的受體酶活性又進一步增強。更重要的是，磷酸化的受體募集含有sh2結構域的信號分子，從而將信號傳遞至下游分子，發揮重要的生理作用。

4.胞內受體介導的信號轉導機制

已知通過胞內受體調節的激素有糖皮質激素、鹽皮質激素、雄激素、孕激素、雌激素、甲狀腺素、維a酸、1，25-(oh)2維生素d3。位于細胞內的受體多為轉錄因子，當與相應配體結合后進入細胞核內，與dna的順式作用元件結合，在轉錄水平調節基因表達。胞內受體通常有四個結構區域。

知識點三：重組dna技術

1.重組dna技術的概述(重要考點)

1.1.概念

①自然界基因轉移和重組：重組dna技術是在人們對自然界基因轉移和重組的認識基礎上創立的新技術。自然界基因轉移伴發重組有幾種形式：位點特異的重組、同源重組及轉座重組。依賴整合酶、在兩個dna序列的特異位點間發生的整合稱位點特異的重組。發生在同源序列間的重組稱為同源重組，又稱基本重組。

②重組dna技術：細菌的基因轉移包括接合作用、轉化作用和轉導作用等(各概念詳見課本)。在接合、轉化、轉導或轉座過程中，不同dna分子間發生的共價連接即為重組。

克隆就是來自同一始祖的相同副本或拷貝的集合。獲取同一拷貝的過程稱為克隆化，也就是無性繁殖。為研究基因的結構與功能，從構建的基因組dna文庫或cdna文庫分離、增某一感興趣的基因就是基因克隆或分子克隆，又稱重組dna技術。

1.2.基因工程基本原理

一個完整的基因克隆過程應包括：目的基因的獲取，克隆基因載體的選擇與改造，目的基因與載體的連接，重組dna分子導入受體細胞，篩選出含感興趣基因的重組dna轉化細胞。實現上述過程需要一些重要的工具酶，如限制性內切核酸酶連接酶等。限制性內切核酸酶是一類識別dna特意序列的內切核酸酶，它的作用特異切開雙鏈dna。

例題

限制性內切酶的作用是：

a.特異切開單鏈dna

b.特異切開雙鏈dna

c.連接斷開的單鏈dna

d.切開變性的dna

e.切開錯配的dna

答案：b

①目的基因的獲?。和庠椿蛴址Q目的基因，來源于幾種途徑：化學合成、酶促合成cdna，制備的基因組dna及pcr技術。

②基因載體的選擇與構建：可作為基因載體的dna分子有質粒dna、噬菌體dna和病毒dna，它們經適當改造后仍具有自我復制能力，或兼有表達外源基因的能力。

③外源基因與載體連接：連接方式有：黏性末端連接、平端連接和人工接頭連接等。

④重組dna導入宿主細胞：外源dna與載體在體外連接成重組dna分子，需將其導入宿主細胞。隨受體細胞生長、增殖，重組dna分子得以復制、擴增。

⑤重組體的篩選：鑒定哪一菌落或嗜菌斑所含重組dna分子確實帶有目的基因，即可得到目的基因的克隆，這一過程即為篩選或選擇。

⑥克隆基因的表達：在原核或真核表達體系中進行表達，獲得所需要的蛋白質。

例題

1.在分子生物學領域中，分子克隆主要是指：

a.dna的大量復制

b.dna的大量剪切

c.rna的大量復制

d.rna的大量剪切

e.反轉錄酶

答案：a

2.與重組體的篩選無關的是

a.抗藥性標志選擇

b.分子雜交法

c.酶免檢測分析

d.免疫化學法

e.克隆載體的改建

答案:e

2.基因工程與醫學

(1)疾病基因的發現：不僅可以發現新的遺傳疾病，而且對遺傳病的診斷和治療有著極其重要的意義。

(2)發展新藥物：利用基因工程技術生產了許多有藥用價值的蛋白質和多肽。

(3)dna診斷：又稱基因診斷，是利用分子生物學及分子遺傳學的技術和原理，在dna水平上分析、鑒定遺傳性疾病所涉及的基因的置換、缺失或插入等突變。

(4)基因治療：是向功能缺陷的細胞補充相應功能的基因，以糾正或補償其基因缺陷，達到治療目的。包括體細胞基因治療和性細胞基因治療。

(5)遺傳病的防治：①產前診斷;②攜帶者測試基因;③癥候前診斷;④遺傳病易感性。

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（責任編輯：中大編輯）

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