臨床執業醫師考試生物化學知識點精講
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3.dna變性及其應用
3.1.dna變性和復性的概念
在極端的ph值(加酸或堿)和受熱條件下,dna分子中雙鏈間的氫鍵斷裂,雙螺旋結構解開,這就是dna的變性。變性后的dna在260nm的紫外光吸收增強,稱為高色效應。在dna變性中以dna的熱變性意義最大。dna的熱變性又稱dna的解鏈或融解作用。在dna熱變性過程中,使紫外吸收達到最大增值50%時的溫度稱為解鏈溫度,又稱融解溫度tm。tm與dna分子g+c量有關。
熱變性的dna溶液經緩慢冷卻,兩條解鏈的互補單鏈重新締合,恢復雙螺旋結構,即退火。變性dna經退火恢復原狀的過程稱變性dna的復性。伴隨復性,dna溶液紫外吸收減弱,稱減色效應。
3.2.核酸雜交
復性是指核酸雙鏈分子中分開的兩股單鏈重新結合。復性可以發生在具有堿基配對的不同來源的核酸鏈之間,形成雜化雙鏈,這一過程稱為核酸雜交,生成的雙鏈稱為雜化雙鏈。核酸雜交技術(例:核酸探針)是目前研究核酸結構、功能常用的手段之一。
4.rna結構與功能
rna與dna不同,它通常以數十個至數千個核苷酸組成的單鏈形式存在,但也可以有局部的二級結構或三級結構。它比dna分子小,它的功能多樣,種類較多,主要有信使rna(mrna)、轉運rna(trna)、核糖體rna(rrna)三類。
4.1. 信使rna(mrna):
mrna為線狀單鏈結構。可作為蛋白質合成的模板。
真核生物:①mrna在5’-端含倒裝的7-甲基三磷酸鳥苷(m7gppp),稱為帽子結構(可避免核酸酶的降解)。②mrna的3’-末端有一段長短不一的多聚腺苷酸polya序列,由數十個至上百個腺苷酸連接而成。3’-末端的多聚腺苷酸結構可增加轉錄活性,增加mrna穩定性。③5’加“帽”、3’加“尾”屬轉錄后加工過程。④分子中有修飾堿基并有編碼區和非編碼區。
原核生物:①mrna往往是多順反子②無帽子結構無多聚a尾巴③無修飾堿基。
分子中的每3個核苷酸為一組,決定肽鏈上一個氨基酸,稱為遺傳密碼。其特點:①三個相連核苷酸組成一個密碼子,編碼一個氨基酸,共有64個密碼子。②密碼子之間無核苷酸間隔。③一種氨基酸可有多種密碼子。④所有生物使用同一套密碼子。
4.2.轉運rna(trna):
70至90個核苷酸構成。分子中含有稀有堿基,包括雙氧尿嘧啶、假尿嘧啶和甲基化的嘌呤。
①trna的作用是攜帶相應的氨基酸將其轉運到核蛋白體上以供蛋白質合成。
②trna的二級結構呈三葉草樣。
③trna的三級結構呈倒l形。
4.3.核蛋白體rna(rrna):
細胞內含量最多的rna,約占rna總量的80%以上。rrna與核糖體蛋白共同構成核糖體。rrna由大亞基和小亞基組成。真核生物的核糖體小亞基由18srrna和30多種核糖體蛋白構成,大亞基則由5s、5.8s及28s三種rrna與50種核糖體蛋白組成。當大小亞基聚合時,可作為蛋白質合成的場所。
例題
下列關于核糖體的組成和功能的描述,正確的是
a.只有rrna b.有轉運氨基酸的作用
c.由trna和蛋白質組成d.遺傳密碼的攜帶者
e.蛋白質的合成場所
解析:該題目屬于理解應用型,答案選擇e
知識點三:酶
1.酶的催化作用(重要考點)
1.1.酶的分子結構與催化作用
酶是由活細胞產生,能在體內外對其底物起催化作用的一類蛋白質。
體內多數酶類屬于結合蛋白質的酶類,分為兩部分,蛋白質部分稱為酶蛋白(決定酶反應特異性),非蛋白質部分稱輔助因子(參與酶蛋白的催化反應)據結合強弱分為輔基和輔酶。
酶分子中與酶活性有關的化學基團稱為必須基團,而必須基團在空間位置上相對集中形成的特定空間結構區域,是酶發揮催化作用的關鍵部位,稱為酶的活性中心。
例題
酶促反應中決定酶專一性的部位是
a.酶蛋白 b.輔基或輔酶
c.金屬離子 d.催化基因
e.底物
解析:該題目屬于識記型,答案選擇a
1.2.酶促反應的特點(高效性、專一性、不穩定性、可調控性)
酶是一類生物催化劑,遵循一般催化劑的基本規律(例:反應前后質量不變,只能加速而不能改變反應)。由于酶的化學本質是蛋白質,因而具有一些獨特的催化性質:①酶能顯著地降低反應活化能,具有極高的催化效率。②每種酶都選擇性地催化一種或一類化合物,具有高度的特異性;③酶是蛋白質,其空間結構可受到各種理化因素的影響以致改變酶的催化活性,所以酶具有高度的不穩定性;④酶促反應受多種因素調控以適應機體對不斷變化的內外環境和生命活動的需要。
1.3.酶-底物復合物
酶在發揮催化作用前,需與底物密切結合。這種結合是酶與底物結構的相互誘導、相互形變、相互適應的過程(誘導契合學說),從而形成酶-底物復合物。
2.輔酶與酶輔助因子
除了單純由氨基酸殘基形成的單純蛋白質作為酶以外,更多的酶需要輔助因子參與作用,通常被稱為結合酶,其中酶的蛋白質部分稱為酶蛋白。根據輔助因子與酶蛋白結合成全酶的牢固程度,又分為輔酶和輔基兩類。輔酶為結構復雜的小分子有機物,通過非共價鍵與酶蛋白疏松結合,可用透析、超濾等方法而分離;輔基則常以共價鍵與酶蛋白牢固結合,不易與酶蛋白分離。除了上述輔酶外,酶輔助因子主要是各種金屬離子,如zn2+、fe2+、cu2+、mn2+、ca2+、mg2+、na2+和k+等。
表1-2 酶蛋白與輔酶因子
酶蛋白
輔助因子
物質成分
蛋白質
非蛋白質
結合特點
一種酶蛋白只能結合一種輔助因子形成全酶
一種輔助因子可與不同的酶蛋白結合形成不同的全酶
參與反應
催化一定的化學反應
催化不同的化學反應
特性
決定反應的特異性
決定反應的種類和性質
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